Fënnef Stäerkt:
● Instrument konfiguréiert mat der Nukleinsäure Extraktioun a gereinegt Schrëtt
● Instrument konfiguréiert mat Ultraschall Extraktioun Modul
● Instrument konfiguréiert mat voll automatesch
● Instrument konfiguréiert mat variabelen Temperatur amplification
● Instrument konfiguréiert mat voll zouene Reagenz Kit
1. Musse Nukleinsäure Detektiounsreagenser extrahéiert a gereinegt ginn?
De Prinzip vun der Nukleinsäureerkennung ass wéi follegt: ënner der Handlung vum Primer gëtt DNA Polymerase benotzt fir Kettenreaktiounsverstärkung op Schabloun DNA / RNA auszeféieren (reverse Transkriptioun vun NA erfuerdert), an dann gëtt d'Quantitéit vum fluoreszent Signal erausgestallt fir ze bestëmmen. ob d'Probe d'Nukleinsäure (DNA / RNA) vum Pathogen enthält, deen ze erkennen.
1) Echantillon, déi net extrahéiert oder gereinegt goufen, kënne vill Komponenten enthalen déi d'Finale Resultat beaflossen: Nuklease (wat d'Zilnukleinsäure kann opléisen a falsch negativ verursaachen), Protease (wat d'DNA-Polymerase reduzéiere kann a falsch negativ verursaachen), Schwéiermetall Salz (wat zu der Inaktivéierung vu Synthase féiert a falsch Positiv verursaacht), ze sauer oder ze alkalesch PH (wat d'Reaktioun verursaache kann), Onkomplett RNA (féiert zu falschen negativen ëmgedréint Transkriptiounsfehler).
2) E puer Echantillon si schwéier direkt ze verstäerken: Gram-positiv an e puer Parasiten, wéinst hiren décke Zellmaueren an aner Strukturen, wa se net duerch d'Nukleinsäure-Extraktioun a Purifikatiounsprozess goen, kann den Extraktiounsfräie Kit fir sou Echantillon.
Dofir ass et recommandéiert den Testkit oder den Instrument ze wielen deen mam Nukleinsäure Extraktiounsschrëtt konfiguréiert ass.
2. Chemesch Extraktioun oder kierperlech Ultraschall Fragmentatioun Extraktioun?
Allgemeng kann chemesch Extraktioun op déi meescht vun der Virbehandlung a Purifikatioun applizéiert ginn.Wéi och ëmmer, an déckwandeg Gram-positiv Bakterien an e puer Parasiten, ass et och de Fall datt chemesch Extraktioun keng effektiv Nukleinsäure Schablounen kritt, wat zu falschen negativen Detektioun resultéiert.Zousätzlech benotzt d'chemesch Extraktioun dacks staark Agenten, wann d'Elutioun net grëndlech ass, ass et einfach staark Alkali an de Reaktiounssystem anzeféieren, wat zu ongenaue Resultater resultéiert.
Ultrasonic Fragmentatioun benotzt kierperlech Zerstéierung, déi erfollegräich vun GeneXpert benotzt gouf, e féierende Entreprise am Beräich POCT fir mënschlech Benotzung, an huet en absolute Virdeel an der Nukleinsäure Extraktioun vun e puer komplexe Proben (wéi Mycobacterium Tuberculosis).
Dofir ass et recommandéiert en Testkit oder Instrument ze wielen deen mat engem Nukleinsäure Extraktiounsschrëtt konfiguréiert ass.an et ass optimal wann et en Ultraschall Extraktioun Modul ass.
3. Manuell , Semi-automatesch a voll automatesch?
Dëst ass e Problem vun der Aarbechtskäschte an der Aarbechtseffizienz.Am Moment sinn Hausdéieren Spideeler ouni genuch Personal, an Nukleinsäure Extraktioun an Detektioun ass eng Aarbecht déi gewësse Fäegkeeten an Erfahrung erfuerdert.Et gëtt keen Zweiwel datt déi voll automatesch Nukleinsäure Extraktioun an Detektiounsmaschinn déi perfekt Wiel ass.
4. Konstant Temperaturverstäerkung oder Variabel Temperaturverstäerkung?
D'Verstäerkungsreaktioun ass eng Nukleinsäure Detektiounslink, an déi professionell Technologie, déi an dësem Link involvéiert ass, ass komplex.Grof geschwat ginn Enzyme benotzt fir d'Nukleinsäure ze verstäerken.Am Verstäerkungsprozess gëtt dat verstäerkte Fluoreszenzsignal oder dat embedded Fluoreszenzsignal festgestallt.Am Allgemengen, wat méi fréi d'Fluoreszenz Signal erschéngt, dest méi grouss ass den Zilgeninhalt vun der Probe.
Konstant Temperatur Verstäerkung ass eng Nukleinsäure Verstäerkung bei enger fixer Temperatur, während variabel Temperatur Verstäerkung eng zyklesch Verstäerkung strikt no Denaturatioun-Annealing-Extensioun ass.Déi konstant Temperaturverstäerkungszäit ass duerchgefouert ginn, während d'Variabel Temperaturverstäerkungszäit staark beaflosst ass duerch den Taux vun der Temperaturerhéijung a vum Fall vum Instrument (am Moment hu vill Hiersteller fäeg 40 Zyklen vun der Verstäerkung an ongeféier 30 Minutten ze maachen).
Wann d'Laborbedéngungen gutt sinn an d'Zonéierung strikt ass, ass et raisonnabel ze soen datt d'Genauegkeetsënnerscheed tëscht deenen zwee net grouss wäert sinn.Wéi och ëmmer, Variabel Temperaturverstäerkung wäert méi Nukleinsäureprodukter an enger relativ kuerzer Zäit synthetiséieren.Fir Laboratoiren ouni strikt Zoning a berufflech Ausbildungspersonal ass de Risiko vun der Nukleinsäure Aerosol Leckage méi grouss, de falsche Positiv geschitt eemol Leckage geschitt, an dat ass extrem schwiereg ze eliminéieren.
Zousätzlech ass konstant Temperaturverstäerkung och méi ufälleg fir net-spezifesch Verstäerkung wann d'Probe komplex ass (d'relativ Reaktiounstemperatur ass méi niddereg, a wat méi héich d'Extensiounstemperatur ass, wat besser d'Primerbindungsspezifizitéit ass).
Wat déi aktuell Technologie ubelaangt, ass d'Variabel Temperaturverstäerkung méi zouverlässeg.
5. Wéi vermeide een de Risiko vu Leckage vun Nukleinsäure Amplifikatiounsprodukter?
Am Moment wielen vill Hiersteller den Drüstyp PCR Röhre als Nukleinsäurereaktiounsröhre, dat duerch Reibung versiegelt ass, an d'Temperaturdenaturatioun an der Variabel Temperaturdenaturatioun an der Variabel Temperatur PCR Amplifikatioun erreecht 90 Grad
Celsius.De widderholl Prozess vun der Expansioun mat Hëtzt a Kontraktioun mat Kälte ass eng grouss Erausfuerderung fir d'Versiegelung vum PCR-Röhre, an d'Drüstyp PCR-Röhre ass relativ einfach Leckage ze verursaachen.
Et ass léiwer d'Reaktioun mat engem komplett zouene Kit / Rouer unzehuelen fir d'Leckage vum Reaktiounsprodukt ze vermeiden.Et wier perfekt wann et e komplett zouene Kit fir Nukleinsäure Extraktioun an Detektioun ka ginn.
Also dem New Tech seng nei voll automatesch Nukleinsäure Extraktioun an Detektiounsmaschinn huet déi uewe genannte fënnef optimal Wiel.
Post Zäit: Aug-09-2023
